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產品名稱:

蛋白酶K (Merck原裝)

產品型號: 1245680100 產品時間: 2020-06-24
蛋白酶K (Merck原裝)1245680100
英文名稱
Proteinase K
CAS
39450-01-6
儲存條件
-20℃,避免反復凍融,有效保證12月。
外觀(性狀)
凍干粉
單位

說明:枯草蛋白酶類高活性蛋白酶,生物實驗室常用酶之一。該酶在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。用于mRNA和DNA與蛋白質的分離。

產品概述

蛋白酶K (Merck原裝)1245680100

蛋白酶K (Merck原裝)1245680100

 

英文名稱

 

Proteinase K

CAS39450-01-6
儲存條件-20℃,避免反復凍融,有效保證12月。
外觀(性狀)凍干粉
單位

說明:枯草蛋白酶類高活性蛋白酶,生物實驗室常用酶之一。該酶在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。用于mRNA和DNA與蛋白質的分離。

活力:40mAnsom u/mg
性狀:粉末,是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶,來源于白色念球菌(. Tritirachium album. ),具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活,反而增強和穩定酶活性,并在較廣的PH范圍內(PH4-12.5)均有活性。在組織或細胞核酸分離時,使核酸酶(RNA和DNA)以及反應中其他酶失活。
用途:生化研究。廣譜蛋白酶,95C加熱10分鐘,則完全失活。可替代DEPC處理RNA抽提用的離心管和 頭,實現滅活RNase A的目的,也用于處理RNase-Free的水。充分降解組織或細胞中蛋白質分子特別是核酸,以達到釋放和萃取高質量核酸的輔助試劑。用于質粒或基因組DNA、RNA的分離以及蛋白多肽印跡實驗。

蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。該酶有兩個ca2+結合位點,它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機理并無直接關系。然而,如果從該酶中除去ca2+,由于出現遠程的結構變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。所以,蛋白酶k消化過程中通常加入edta(以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性。
推薦反應緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。


蛋白酶k的作用
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果.

孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

 

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