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產品名稱:

胎牛血清

產品型號: GIBCO 產品時間: 2019-12-03
GIBCO胎牛血清細胞凍存步驟以及真假辨別詳細說明。
根據您的特定細胞培養需求(從基礎研究到專業檢測)選擇適合的血清。無論您是需要具有最低病毒風險、最低內毒素水平的血清,還是需要適用于特殊應用和分析的血清,Gibco 產品都能提供卓越的價值。秉承我們對品質的堅定承諾

產品概述

   GIBCO胎牛血清細胞凍存步驟

  1、在冷凍管上標記好日期、研究者姓名、細胞數、細胞傳代數和細胞類型(以及任何其他有用信息,比如遺傳修飾)。

  2、如果細胞貼壁,則去除細胞培養基,用 PBS 洗滌,加入足量胰蛋白酶覆蓋細胞并在 37°C 培養箱中孵育約 2 分鐘。在細胞培養基中重懸細胞并移入 50 mL Falcon 管中。

  3、如果細胞為懸浮狀態,只需將所需體積細胞直接移入 50 mL Falcon 管中。

  4、用血細胞計數器進行細胞計數以確定其活力。用于冷凍保存的細胞活力至少應為 75%。

  5、在室溫下以 1,000 rpm 離心 5 分鐘。

  6、去除上清液,輕輕散開沉淀物。

  7、添加冷凍培養基至所需的細胞密度。對于哺乳動物細胞,所需細胞密度通常為10^6/mL 冷凍培養基。在室溫下,細胞不應在冷凍培養基中超過 10 分鐘。

  8、在各冷凍管中各分裝 1 mL,并蓋緊蓋子。

  9、室溫下將冷凍管移至 CoolCell 快速冷凍機中,然后放入 -80°C 冰箱中。CoolCell 快速冷凍機將確保溫度以 1°C/分鐘穩步下降。

  10、大約 24 小時后,從 CoolCell 快速冷凍機中取出冷凍管并轉移到液氮中長期儲存。

  更換GIBCO胎牛血清有技巧:

  a。不同來源或不同批次GIBCO血清的更換:在一個批次的血清快使用完畢,需更換使用不同來源或不同批次的血清時,宜讓細胞有一個逐步適應新血清的過程,這樣就幾乎不會因為更換血清而影響細胞的生長狀態。具體的方法是,在初始使用舊批次血清的情況下,逐漸增加不同來源或不同批次血清的比例,例如把不同來源或不同批次血清的比例逐步調整為0%、30%、60-70%、100%。這樣經過約3代細胞的逐漸適應,細胞通常會在新來源或新批次的血清中生長良好。

  b.從GIBCO血清更換成新生牛血清:有的些細胞,如HEK293、HEK293T、HeLa、CHO-K1、NIH3T3等常見細胞株通常是可以用新生牛血清培養的。如果之前是使用胎牛血清,想更換為新生牛血清培養,也需要讓細胞有一個逐步適生牛血清的過程。例如把新生牛血清的比例逐步調整為0%、30%、60-70%、100%。對于不太確定是否適合新生牛血清培養的細胞。

血清真假辨別:

  一、外觀

  拿到血清,先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養經驗的人來說,外觀的判斷尤為重要

  1、GIBCO血清顏色

  根據血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現出黃色或紅色,我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

  假的血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現出明亮的蠟黃色,當然,假的血清也很少有標準意義上的胎牛血清。

  進口血清或多或少總有點溶血,因為真正的血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。

  總的來說,假的的血清呈現出蠟黃。進口的血清,質量好的呈現出談黃、微紅色,差點的呈現出橘紅色或鮮紅色。當然,熱滅活血清或保存不當的血清,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現出暗紅,甚至咖啡色。

  2、GIBCO血清沉淀

  很多血清客戶,會發現進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量問題,這是沒有根據的。

  血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生,對血清質量沒有任何影響,沉淀的產生原因很多,和廠家的加工生產方式密切相關。

  假的的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環境都不好,從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”,很少有沉淀產生。

  GIBCO血清過濾分裝前很少會反復凍融,生產后的成品也是清澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產后血清可能會渾濁,甚至有大量沉淀。

  當然,購買回來的血清都是冰凍狀態,使用時需要融化,融化過程好在溫度較低的狀態下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

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